Познание мира

Что такое радиоиммуноанализ (РИА)?

Радиоиммуноанализ является одним из чувствительных методов иммунологического анализа, который помогает в определении антигена или антител в образце с использованием радиоизотопов.

Изобретен в 1960 году Розалин Ялоу и Соломоном Берсоном в больнице Управления по делам ветеранов в Нью-Йорке.

Антигены с радиоактивной меткой: антигены обычно метят изотопами, излучающими гамма-излучение, такими как I-125, и изотопами, излучающими бета-излучение, такими как тритий. Их также называют горячими антигенами.

Специфические антитела: они требуются в меньших количествах, чем антигены.

Немеченые антигены (антигены образцов): их также называют холодовыми антигенами.

Принцип

1. Антиген и антитела специфически связываются, образуя комплекс Ag-Ab.
2. Антиген может быть помечен или конъюгирован с радиоизотопами.
3. Немеченые антигены из образца конкурируют с антигенами, мечеными радиоактивным изотопом, за связывание на паратопах специфических антител. Немеченые антигены заменяют меченые антигены, которые уже связаны с антителами.
4. Немеченые антигены при связывании с антителами увеличивают количество свободных радиоактивно меченых антигенов в растворе. Следовательно, концентрация свободных меченых антигенов прямо пропорциональна количеству связанных немеченых антигенов.

Процедура радиоиммуноанализа (РИА)

1. В лунке микротитра фиксируют специфические антитела известной концентрации.
2. Затем в лунку добавляют известное количество горячих антигенов.
3. Тщательно промывают для удаления любых несвязавшихся антигенов.
4. В этот момент радиоактивность скважины будет максимальной.
5. Затем в лунку добавляют немеченые антигены. 
6. Немеченые антигены будут связываться с антителами, и в лунке будут свободные меченые антигены.
7. Снова тщательно промывают, чтобы удалить свободные меченые антигены.
8. Затем с помощью гамма-счетчика измеряют радиоактивность скважин.

Интерпретация результатов радиоиммуноанализа (РИА)

Сначала меченые антигены будут связываться с антителами, поэтому радиоактивность будет максимальной.

Если образец содержит специфические интересующие антигены, он будет связываться с антителами, высвобождая меченые антигены, и, следовательно, радиоактивность раствора снизится. 

Таким образом, наблюдая снижение радиоактивности, можно подтвердить, что в образце присутствует интересующий антиген. И если радиоактивность остается прежней, то это можно назвать отрицательным тестом.

С увеличением концентрации немеченых антигенов радиоактивность снижается. Построив график зависимости радиоактивности (в процентах) от концентрации немеченых антигенов, получают стандартную кривую. 

Образец для анализа анализируют параллельно, следуя аналогичной процедуре, и измеренную радиоактивность калибруют по стандартной кривой для определения концентрации антигена.

Применение радиоиммуноанализа (РИА)

1. Впервые он был использован для обнаружения пептидных гормонов.
2. Обнаружение различных вирусных антигенов.
3. Обнаружение многих гормонов и лекарств.
4. Обнаружение поверхностных антигенов гепатита В.
5. Обнаружение микотоксинов.
6. Выявление ранней стадии рака.

Преимущества радиоиммуноанализа (РИА)

1. Высокая специфичность.
2. Высокая чувствительность.
3. Может обнаруживать очень небольшое количество (нанограммы) антигена или антител.

Ограничения

1. Работа с радиоактивными веществами делает ее немного рискованной.
2. Утилизация радиоактивных веществ может быть проблематичной.
3. Оборудование и реагенты дорогие.
4. Используемые вещества с радиоактивной меткой имеют короткий срок годности.